Unidad de determinación y diagnóstico experimental por mirnas

Desarrollado por: Instituto de Investigación Sanitaria del Hospital Ramón y Cajal (IRYCIS)

Descripción

Resumen

Los miRNAs son RNAs de pequeño tamaño (22-25 nt) codificados endógenamente capaces de reconocer RNAs mensajeros y así regular negativamente la expresión de proteínas, dentro de complejos de silenciamiento inducido (RISC) por complementaridad total o parcial con su mRNA diana a través de una pequeña secuencia central (seed sequence). En humanos se han clonado ya más de 800 y predicciones bioinformáticas indican que todos ellos pueden controlar la expresión de más del 30% del total de proteínas. Su función es esencial en una amplia variedad de procesos incluidos el desarrollo embrionario, la respuesta a estrés o la regulación estricta de procesos fisiológicos y por tanto, el mantenimiento de la homeostasis de los organismos. Es importante destacar que el perfil de expresión de miRNAs es específico de tipo celular y puede cambiar dependiendo del estímulo, de tal forma que el contexto celular particular de un mismo miRNA determinará su función en un tipo celular específico.

Por ello, la desregulación de algunos miRNAs se ha señalado entre los mecanismos responsables del desarrollo de patologías como el cáncer, la autoinmunidad, la diabetes, patologías vasculares o diversas nefropatías y se están constituyendo como biomarcadores precisos diagnósticos y de la evolución (pronóstico) de muchas de ellas. Por otro lado, se ha demostrado además, que estos miRNAs junto a mRNAs pueden ser secretados o intercambiados por las células en forma de micropartículas (microvesículas de plaquetas; exosomas de células tumorales; ectosomas de neutrófilos o unidos directamente a proteínas del complejo RISC como Argonauta 2, demostrando gran estabilidad, aún en condiciones muy agresivas. Así pueden ser detectados en medios extracelulares y fluidos corporales como sangre, orina o líquido pleural. De hecho, se estima que la sangre periférica de individuos sanos puede contener una concentración entre 5-50 ug/ml de micropartículas, que incrementaría en caso de pacientes con diversas patologías.

Dado que la desregulación de miRNAs puede causar diversas patologías, éstos están empezando a ser considerados como nuevas dianas de actuación terapéutica. De hecho, se han desarrollado herramientas para modular su expresión: pre-mirs para sobrexpresarlos y antagomirs (anti-mirs) para inhibirlos, con resultados muy esperanzadores en diversos modelos experimentales in vitro e in vivo, incluso de forma experimental también en humanos.

Equipamiento/ Know-How del grupo relevante

El grupo cuenta con equipamiento apropiado y suficiente para la determinación de

miRNAs por qRT-PCR e hibridación in situ:

  •  Campanas pre-PCR
  •  Termocicladores (Life Technologies) para RT
  •  Termociclador Lightcycler 480 (Roche) para amplificación
  •  Software apropiado para el análisis de datos
  •  Hibridador (Dako)
  •  Equipamiento de inclusión en parafina y microtomos
  •  Sala de cultivos celulares
  •  Microscopio de campo claro y fluorescencia
  •  Equipamiento básico para técnicas de Biología Molecular y Celular

Aplicaciones

  •  Estudios de caracterización de miRNAs en modelos experimentales in vitro e in vivo.
  •  Identificación y validación de miRNAs como biomarcadores diagnósticos, pronósticos y de respuesta a tratamiento en diferentes patologías.
Datos de Contacto
Responsable: Dra. Laura García Bermejo
Contacto (Telf. /Mail): garciabermejo@gmail.com  / 91 336 80 75 // 699 134 789